Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА) представляет собой иммунологический лабораторный тест, позволяющий идентифицировать разнообразные молекулы в биологических образцах. Метод основан на строгой специфичности взаимодействий между антигеном и антителом и ферментативных реакциях, ведущих к изменению окраски реакционной смеси.

На первом этапе антитела, специфичные для идентифицируемого фитопатогена, вносят в лунки пластиковых планшетов. Эти антитела, называемые антителами захвата (capture antibodies), прикрепляются к поверхности. После промывания и удаления избытка антител, в планшеты добавляют растительный материал, как правило, в виде сока или лизата, и, если в нём содержатся молекулы анализируемого патогена (антигены), они специфически связываются с антителами.

На следующем этапе к образовавшимся комплексам антител захвата и антигенов добавляют антитела детекции (detection antibodies), которые также специфичны для анализируемого антигена и связаны с ферментом, способным катализировать превращение бесцветного субстрата в окрашенное вещество. На заключительном этапе в лунки добавляют субстрат и отслеживают развитие окраски.

Таким образом, при наличии в растительном материале антигенов исследуемого фитопатогена, реакционная смесь становится окрашенной, тогда как образцы здоровых растений остаются прозрачными. Изменение окраски может быть измерено и её интенсивность прямо пропорциональна количеству антигена в растительном материале.

Исследовательский центр «ФитоИнженерия» проводит иммуноферментную диагностику инфекционных заболеваний картофеля, вызванных вирусами Y, X, A, M, S и вирусом скручиваемости листьев картофеля. Материалом для диагностики вирусов картофеля могут быть листья растений, собранные в период вегетации, и клубни как заложенные на хранение, так и готовые к посадке. В первом случае диагностика растительного материала картофеля на наличие вирусов производится непосредственно в листьях.

Анализ клубней требует больше времени: клубни должны быть сначала пророщены, а содержание вирусов определяется уже в полученных побегах. Необходимость проращивания клубней объясняется тем, что количество частиц вирусов в клубнях, как правило, ниже пределов чувствительности иммунологических методов анализа, тогда как инфицированные молодые побеги всегда содержат достаточное количество вирусов. Определение вирусного статуса клубней позволяет осуществлять как диагностику посадочного материала картофеля, так и диагностику семенного материала картофеля.